...

parasitov.net

Основы цитологии

Механизм действия перелитой крови

Разделение по механизму действия перелитой крови является искусственным, однако оно необходимо для понимания происходящих процессов.
Заместительное действие. Прежде всего восстанавливается объем циркулирующей крови. В организм поступают эритроциты, носители гемоглобина, переносчика кислорода, белки, гормоны, антитела.
Гемостатическое действие. Перелитая кровь активирует процессы образования протромбина, свертывания крови, понижает проницаемость сосудистой стенки, восполняет отсутствующие факторы свертывания крови.
Дезинтоксикационное действие обусловлено снижением концентрации токсинов, происходящим за счет их разведения и адсорбции токсинов белками и эритроцитами крови. Особенно хорошо этот эффект выражен при предварительном выпускании крови. Называются такие трансфузии обменно-замещающими.
Стимулирующее действие проявляется ответной реакцией со стороны нервной системы, костного мозга, приводящей к улучшению всех функций организма. Иммунологическое действие проявляется в активизации защитных сил организма. Переливаются вместе с донорской кровью антитела, гормоны.
Питательное действие заключается во введении необходимых для энергетических и пластических целей компонентов — белков, углеводов, жиров, витаминов. Впервые оно было описано
H. И. Пироговым, который в эксперименте на голодных собаках получил разительный эффект от переливания крови. Умирающие собаки во время трансфузии оживали и начинали проявлять интерес к окружающему.


 

Переливание крови и критика понятия «универсальный донор»

Донором называют человека, который дает свою кровь для лечения больных, реципиентом — человека, которому вливают кровь. Ранее при гемотрансфузии учитывались переливаемые эритроциты донора и плазма реципиента — правило Оттенбер-га, которое имеет наглядное графическое изображение (рис. 4). На этом основаны понятия «универсальный донор» и «универсальный реципиент». Под названием «универсальный донор» понималась такая донорская группа крови, которую можно переливать лицам со всеми группами крови. И наоборот, «универсальный реципиент» — это такая группа крови, в которую можно переливать кровь различных групп доноров. В настоящее время переливается только одногруппная кровь. Кровь первой группы OI, которая раньше считалась «универсальной», при повторных трансфузиях (редко — при первых) вызывает реакции.
Критика понятия «универсальный донор». Вызвано это тем, что под «О» скрывается агглютиноген со слабыми антигенными свойствами. Во время первого переливания «универсальной» донорской крови реципиентам с любой из трех групп крови (II, III, или IV) происходят иммунизация и выработка агглютининов анти-О.  При повторном переливании крови происходит реакция агглютинации антиген-антитело между агглютиногеном О и агглютининами анти-О.
Кроме того, пользуясь правилом Оттенберга, мы не учитывали агглютинины переливаемой крови, которые способны вызвать обратную агглютинацию между перелитыми агглютининами и агтлютиногенами крови реципиента, что выглядит следующим образом.
При вливании «универсальной» донорской крови реципиентам со II группой крови происходит агглютинация между агглютинином альфа и агглютиногеном А.
lap — ПА
Вливание «универсальной» донорской крови реципиентам с III группой крови приведет к агглютинации между агглютинином бета и агглютиногеном В.
lap — ШВ
Наконец, вливание «универсальной» донорской крови реципиентам с IV группой крови приведет к возникновению агглютинации между агглютининами альфа и бета и агглютиногенами А и В. Эти два положения заставляют пересмотреть правило Оттен-берга, отказаться от понятия «универсальный донор» и переливать реципиентам только одногруппную кровь (рис. 5, 6).
 

Показания к переливанию крови

Показаний к переливанию цельной крови нет. Оправдано переливание цельной крови только при отсутствии компонентов крови в случаях острых массивных кровопотерь.
Показания к переливанию компонентов крови могут быть только абсолютные, когда больной без переливания крови погибнет. В этих случаях по понятным причинам противопоказаний для переливания крови нет. Переливания производят при следующих патологических процессах:
1) острой кровопотере;
2) травматическом и операционном шоке, сопровождающемся кровопотерей;
3) нарушении свертывающей системы крови (гемофилия, гипо-и афибринемия).
Переливание крови является лишь одним из компонентов комплексного лечения.
Переливание крови при условии соблюдения всех требований является безопасным методом. При отступлении от установленных правил по технике и методике переливания, при недоучете состояния больного могут возникнуть посттрансфузионные реакции и осложнения.
 

Определение групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В (антитела моноклональные анти-А и анти-В)

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови человека системы АВО взамен стандартных изогем-агтлютинирующих сывороток.
Определение групп крови системы АВО включает выявление антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами и выявление агглютининов в сыворотке или плазме исследуемой крови стандартными эритроцитами. Антигены А и В определяют с помощью цоликлонов анти-А и анти-В. У доноров обязательно определение не только антигенов в эритроцитах, но и агглютининов в сыворотке (плазме) с помощью стандартных эритроцитов. Основные свойства цоликлональных сывороток. Цоликлоны анти-А и анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителооб-разующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридомные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, которые полностью идентичны по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.
Справка. Клональные антитела. Культура клеток одной специфичности, происходящих из одного лимфоцита, образует клетки одного клона. Главное заключается в следующем: необходимо получить от одной клетки специфические антитела и наработать их в неограниченном количестве. Трудность заключается в преодолении двух задач: во-первых, нормальные клетки после нескольких делений погибают; во-вторых, только раковые клетки способны неограниченно размножаться. Для решения этих двух несовместимых проблем в 1975 году Г. Кёлер и К. Мильштейн создали клеточные гибриды, или гибридомы. Гибридомы — это слияние нормальных лимфоцитов в питательной среде с клетками миеломы. Лимфоциты в этой среде не погибают, а от миелом-ного партнера получают возможность бесконечно размножаться. Таким образом, гибридомный клан размножается, а в результате этого процесса образуются моноклональные антитела.
Лимфоциты, несущие агтлютиноген А, вырабатывают специфическое антитело анти-А; лимфоциты, несущие агтлютиноген В, вырабатывают специфическое антитело анти-В.
Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса М (IgM), направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.
Таким образом, цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов.
Авидность, то есть время наступления реакции агглютинации и ее выраженность, у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВО-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов.
Цоликлоны не являются клетками человеческих тканей, что исключает возможность инфекционного заражения.
Методика определения групп крови. Определение групп крови системы АВО реагентами цоликлон производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца; в крови, взятой без консерванта. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.
Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15° до +25°С. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную (анти-А или анти-В) пипетку. Определение группы крови системы АВО производится обычными методами на белой фарфоровой или любой другой планшетке со смачиваемой поверхностью.
Высокая активность и авидность реагентов цоликлон позволяет применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. На плоскость планшета или тарелку наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо брать большое количество эритроцитов, т. е. первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови.
При определении группы крови антитела и кровь смешивают стеклянной палочкой или углом предметного стекла, которые промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли. Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлю-тинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация обычно наступает в первые 3—5 секунд. Наблюдение следует вести не менее 2,5 минуты из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Оценка результатов реакции агглютинации с цоликлона-ми анти-А и анти-В представлена в таблице 1, в которую также включены результаты определения агглютининов в плазме с помощью стандартных эритроцитов. 1. Агглютинации нет (-) ни с цоликлоном анти-А, ни с цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты не содержат агглютиногенов А и В, кровь принадлежит к группе OI. Это подтверждается наличием агглютининов и в исследуемой плазме по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп АН и ВШ.
2. Агглютинация (+) наблюдается только с цоликлоном анти-А. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только агтлютиноген А, кровь принадлежит к группе АН. Это подтверждается наличием агглютининов в исследуемой плазме по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы ВШ.
3. Агглютинация (+) наблюдается только с цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только агглютиноген В, кровь принадлежит к группе ВШ. Это подтверждается наличием агглютининов в исследуемой плазме по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы АН.
4 Агглютинация (+) наблюдается как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат оба агтлютиногена А и В, кровь принадлежит к группе ABIV. Это подтверждается отсутствием агглютининов и в исследуемой плазме по результатам отрицательной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп АН и ВШ.
Контроль неспецифической агглютинации эритроцитов. Реагенты цоликлон для определения групп крови приготовлены на солевом растворе хлористого натрия, который препятствует спонтанной агглютинации эритроцитов. Однако для исключения аутоагглютинации, которая может наблюдаться у некоторых больных (миеломная болезнь, ожоговая болезнь), в случае положительной реакции агглютинации эритроцитов с обоими цолик-лонами анти-А и анти-В, т. е. установления группы крови ABIV, необходимо провести дополнительное контрольное исследование данного образца крови с изотоническим раствором хлористого натрия. Для этого смешивают две капли (0,1 мл) изотонического раствора с маленькой (0,01 мл) каплей исследуемой крови. При отсутствии агглютинации в этой контрольной капле кровь принадлежит к группе ABIV. При наличии спонтанной агглютинации (положительная реакция в контрольной капле) рекомендуется повторить определение группы крови, используя отмытые эритроциты данного образца крови.
Цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета) в жидкой форме выпускаются в ампулах. Срок хранения — 2 года в холодильнике при температуре от +2° до +8 °С.
 

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Для определения групп крови применяют стандартные изо-гемагглютинирующие сыворотки. В сыворотке имеются агглютинины, являющиеся антителами всех 4 групп крови, а их активность определяется титром.
Техника получения сывороток й определения титра заключается в следующем. Для их заготовки используют донорскую кровь. После отстаивания крови, сливания и дефибриллирования плазмы необходимо определить титр (разведение), т. е. активность изогемагглютинирующих сывороток. С этой целью берется ряд центрифужных пробирок, в которых разводится сыворотка. Вначале в чистые пробирки добавляется по 1 мл физиологического раствора поваренной соли. В 1-ю пробирку с физиологическим раствором добавляют 1 мл испытуемой сыворотки, жидкости смешиваются, соотношение жидкостей в 1-й пробирке 1:1. Далее 1 мл смеси из 1-й пробирки переносится во 2-ю, все это смешивается, получается соотношение 1:2. Затем 1 мл жидкости из 2-й пробирки переносится в 3-ю пробирку, смешивается, получается соотношение 1:4. Таким образом разведение сыворотки продолжают до 1:256.
На следующем этапе производят определение титра разведенной сыворотки (рис. 3). Из каждой пробирки на плоскость наносят по 2 крупные капли. В каждую каплю добавляют заведомо иногруппные эритроциты (в соотношении 1 к 10), смешивают, ждут 3—5 минут. Далее определяют последнюю каплю, где произошла агглютинация. Это наибольшее разведение и является титром гемагтлютинирующей сыворотки. Титр не должен быть ниже чем 1:32. Хранение стандартных сывороток допускается в течение 3 месяцев при температуре от +4° до +6 °С с периодическим контролем через 3 недели. Методика определения групп крови. На тарелку или любую белую пластину со смачиваемой поверхностью необходимо нанести цифровое обозначение группы сыворотки и ее серологическую формулу в следующем порядке слева направо: IaB, lip, Ша. Это потребуется для определения исследуемой группы крови.
Стандартные сыворотки системы АВО каждой группы двух различных серий наносят на специальную планшетку или тарелку под соответствующими обозначениями, чтобы получилось два ряда по две большие капли (ОД мл). Исследуемую кровь наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) рядом с каждой каплей сыворотки и перемешивают кровь с сывороткой (соотношение сыворотки и крови 1 к 10). Реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) и отрицательной (отсутствие агглютинации). Результат оценивается в зависимости от реакции со стандартными сыворотками lap, lip, Ша. Оценивают результат через 3—5 минут. Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови по двум сериям стандартных сывороток.
Рассмотрим все возможные варианты при определении групповой принадлежности крови по стандартным гемагтлютиниру-ющим сывороткам. Первая группа стандартных сывороток является контрольной и должна подтверждать полученные данные. Мы начинаем чтение результатов слева направо со II группы сывороток. В этой группе сывороток имеется агглютинин бета, агглютинация не произошла, значит, агглютинин не встретил одноименный агтлютиноген В. Агглютиногена В нет. В III группе сывороток имеется агглютинин альфа, агглютинация произошла, значит, имеется агтлютиноген А. В I группе сывороток произошла агглютинация, там имеются оба агглютинина альфа и бета, агглютинация могла произойти раздельно за счет встречи альфа с А или бета с В или встречи обоих агглютининов альфа и бета с А и В. Однако мы уже знаем, что агтлютиноген А имеется, а агтлютиноген В отсутствует. Мы предполагаем, что агглютинация произошла за счет встречи агглютинина альфа с агглютиногеном А. Следовательно, путем несложных рассуждений мы пришли к заключению, что в испытуемой крови имеется агтлютиноген А, что соответствует II группе крови.Повторяем высказанное положение: I группа сывороток является контрольной. Во II группе стандартных сывороток имеется агглютинин бета, там произошла агглютинация, значит агглютинин бета встретил одноименный компонент В. Агтлютиноген В имеется. В третьей группе агглютинация не произошла, значит, имеющийся агглютинин альфа не встретил агглютиноген А. Агглютиноген А отсутствует. В первой группе сывороток произошла агглютинация, можно предположить, что она произошла за счет встречи агглютинина бета с имеющимся агглютиногеном В. Значит, наличие агтлюти-ногена В указывает на то, что это III группа крови. Вновь повторяем, I группа сыворотки является контрольной. Во II группе сывороток произошла агглютинация, в ней имеется агглютинин бета, значит, он встретил одноименный компонент агглютиноген В. В III группе сывороток также произошла агглютинация, имеющийся агглютинин альфа встретил одноименный компонент агглютиноген А.
Возвращаемся в рассуждениях к контрольной группе сыворотки. В I группе сывороток имеются агглютинины альфа и бета, там произошла агглютинация. Ранее было определено, что имеются агтлютиногены А и В и, по-видимому, агглютинация произошла за счет встречи альфа с А и бета с В. В этом случае для исключения возможности ложной агглютинации мы для контроля применяем IVo сыворотку крови. Если агглютинация произошла, то это говорит о ложном ее характере. Если агглютинация не произошла, то она исключает ложный характер. Следовательно, имеются агглютиногены А и В, что соответствует IV группе крови.
Отметим, что если результаты исследования в контрольных группах не соответствуют результатам в основных группах, то следует сделать заключение о наличии ложной агглютинации и запрещается давать заключение о группе крови.
 

Определение групп крови

В настоящее время существует два метода определения группы крови. Простой — определение антигенов крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и цоликлонам анти — А и анти — В. Цоликлоны, в отличие от стандартных сывороток, не являются продуктами клеток человека, поэтому исключена контаминация препаратов вирусами гепатита и ВИЧ (вирус иммунодефицита человека). Второй метод — перекрестный, заключающийся в определении агтлютиногенов одним из указанных способов с дополнительным определением агглютининов с помощью стандартных эритроцитов.
 
Еще статьи...
Страница 1 из 15


Рейтинг@Mail.ru Информеры пр и тиц